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Mar 23, 2024

CRISPR/Cas12a associé au RPA pour la détection de T. gondii dans le sang total de souris

Parasites & Vectors volume 16, Numéro d'article : 256 (2023) Citer cet article 280 Accès 1 Détails d'Altmetric Metrics Toxoplasma gondii est un protozoaire opportuniste omniprésent chez l'homme et

Parasites & Vecteurs volume 16, Numéro d'article : 256 (2023) Citer cet article

280 accès

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Toxoplasma gondii est un protozoaire opportuniste omniprésent chez les humains et les animaux. Il peut envahir n’importe quel organe humain et provoquer des maladies graves, notamment l’ophtalmopathie toxoplasmique, la méningo-encéphalite et la nécrose hépatique. La toxoplasmose porcine est répandue en Chine. Les systèmes CRISPR (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) et Cas (CRISPR-Associated Protein) sont largement utilisés pour l’édition de gènes et la détection d’agents pathogènes. Les diagnostics basés sur CRISPR sont des tests moléculaires développés pour détecter les parasites avec une sensibilité et une spécificité élevées.

Cette étude visait à établir une méthode combinée de détection rapide CRISPR/Cas12a et RPA pour T. gondii en ciblant le gène B1 et l'élément répété de 529 pb (529 RE). Les résultats de détection pourraient être visualisés par la fluorescence ou les bandelettes à flux latéral (LFS). La sensibilité et la spécificité de la méthode ont été évaluées et du sang de souris infectées par T. gondii a été utilisé pour la détection.

Les résultats ont indiqué que la méthode établie pour la détection de T. gondii était satisfaisante, avec une limite de détection de 1,5 cp/μl pour les deux loci. De plus, le gène B1 pourrait détecter 1 tachyzoïte par réaction, et le 529 RE pourrait détecter 0,1 tachyzoïte par réaction, conformément aux résultats très sensibles de la réaction en chaîne par polymérase (PCR) imbriquée. La méthode convenait aux souches, y compris RH, et n’entraînait pas de réaction croisée avec l’ADN d’autres protozoaires ayant des habitudes similaires. Les échantillons de sang de souris infectés par T. gondii étaient tous positifs pour T. gondii 1, 3 et 5 jours après l'infection (dpi).

Cette étude a établi une méthode de détection de l'ADN de T. gondii rapide, sensible et permettant de gagner du temps, qui pourrait potentiellement constituer un outil alternatif pour la détection de T. gondii sur le terrain.

La toxoplasmose est une maladie humaine-animale causée par un parasite intracellulaire spécialisé, Toxoplasma gondii, avec une distribution mondiale [1]. Toxoplasma gondii gondii peut infecter tous les animaux à sang chaud, y compris les humains [2]. Chez les personnes immunocompétentes, l’infection par T. gondii peut provoquer des symptômes pseudo-grippaux qui persistent pendant des semaines, voire des mois, avant de disparaître. Cependant, les personnes immunodéprimées, telles que celles atteintes du syndrome d'immunodéficience acquise (SIDA), les personnes âgées et celles qui prennent des médicaments immunosuppresseurs, courent un risque plus élevé de maladie grave, voire de décès, suite à une infection à T. gondii [3]. Les femmes enceintes infectées par T. gondii courent également un risque de toxoplasmose congénitale chez le fœtus, ce qui peut entraîner toute une série d'effets indésirables tels qu'un avortement, une malformation ou une mortinaissance [4]. Le taux sérologique positif de T. gondii chez l'homme dans certaines régions de Chine aurait atteint 23,41 %, ce qui indique que l'infection est répandue dans le pays [5]. Outre son impact sur la santé humaine, T. gondii a un impact significatif sur l'élevage, des études montrant que la séroprévalence mondiale de T. gondii chez le porc est de 19 % [6]. L'infection par T. gondii chez les porcs peut présenter toute une série de symptômes, notamment une fièvre manquée, de la diarrhée, un œdème pulmonaire et un avortement chez les truies. Étant donné que le porc est la principale source de viande pour l’homme, la toxoplasmose porcine augmente le risque d’infection humaine par T. gondii. La prévention et le dépistage de T. gondii deviennent de plus en plus importants. Cependant, l’absence de symptômes cliniques spécifiques de la toxoplasmose pose un défi au diagnostic, soulignant la nécessité de développer des méthodes de détection de T. gondii plus efficaces.

La détection de Toxoplasma gondii gondii peut être réalisée grâce à diverses méthodes, notamment des techniques étiologiques, immunologiques et moléculaires. Les méthodes étiologiques, telles que les frottis de liquide péritonéal et la coloration de coupes histologiques, prennent du temps et ont un taux de faux négatifs élevé. Les tests immunologiques, tels que le test immuno-enzymatique (ELISA), sont les méthodes les plus courantes pour détecter la toxoplasmose. Bien que l'ELISA soit simple et rapide, des patients en période fenêtre d'infection peuvent passer inaperçus et il existe divers facteurs interférents, tels que le facteur rhumatoïde [7]. De plus, les patients atteints de leucémie lymphoïde chronique (LLC) et d'hypogammaglobulinémie secondaire peuvent produire des résultats faussement négatifs en raison de leur incapacité à produire des anticorps IgG [8]. En biologie moléculaire, la technologie PCR est la plus utilisée. Burg et coll. a utilisé avec succès la technologie PCR pour détecter l'ADN de T. gondii dans le sang en utilisant le gène B1 comme gène cible au XXe siècle (9). L'utilisation de gènes conservés, tels que le gène P30 et le gène SAG1, a permis de détecter T. gondii (10, 11). La PCR quantitative (Q-PCR) est un dérivé utile de la PCR qui peut être utilisée pour des analyses qualitatives et quantitatives. Cependant, la Q-PCR nécessite des instruments coûteux et précis, ce qui limite son utilisation au laboratoire et la rend impropre aux applications sur le terrain.