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Jun 10, 2024

Une nouvelle stratégie pour dépister les mutations de la tension

Maladies infectieuses de la pauvreté volume 12, Numéro d'article : 74 (2023) Citer cet article 231 Accès 1 Détails d'Altmetric Metrics La stratégie actuelle de prévention et de contrôle d'Aedes albopictus est fortement

Maladies infectieuses de la pauvreté volume 12, Numéro d'article : 74 (2023) Citer cet article

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La stratégie actuelle de prévention et de contrôle d’Aedes albopictus repose largement sur une gestion globale, telle que la gestion environnementale et le contrôle chimique. Cependant, l’application généralisée des pyréthrinoïdes a facilité le développement d’une résistance aux insecticides, principalement via des mutations du gène du canal sodium voltage-dépendant (VGSC). Cette étude vise à développer une nouvelle stratégie de détection des mutations du gène VGSC chez Ae. albopictus en utilisant la technologie de miniséquençage multiplex PCR-spectrométrie de masse (MPCR-MS).

Nous avons établi une nouvelle stratégie pour détecter les mutations du gène VGSC chez Ae. albopictus en utilisant la technologie de miniséquençage MPCR-MS. L'amplification MPCR et l'extension de sonde de masse (MPE) ont été utilisées pour la première fois, suivies par la spectrométrie de masse de typage par polymorphisme nucléotidique unique (SNP), qui permet la détection simultanée de plusieurs sites de mutation du gène VGSC dans 96 échantillons d'Ae. albopictus. Un total de 70 Ae. albopictus ont été utilisés pour évaluer les performances de la méthode en la comparant à d’autres méthodes.

Trois sites cibles (1016, 1532, 1534) dans le gène VGSC peuvent être détectés simultanément par double amplification PCR combinée à une spectrométrie de masse par désorption-ionisation laser assistée par matrice et par spectrométrie de masse à temps de vol, atteignant une limite de détection de 20 fg/μl. Nous avons appliqué cette méthode à 70 Ae prélevés dans la nature. albopictus et les génotypes obtenus étaient cohérents avec les résultats du séquençage de routine, suggérant l'exactitude de notre méthode.

La technologie de mini-séquençage MPCR-MS offre une approche sensible et à haut débit de l'Ae. albopictus VGSC dépistage des mutations du gène. Par rapport au séquençage conventionnel, cette méthode est économique et permet de gagner du temps. Il est très utile pour la surveillance de la résistance aux insecticides dans les zones à haut risque de maladies à transmission vectorielle.

Aedes albopictus est un vecteur majeur de transmission d’arbovirus, notamment le virus de la dengue, le virus chikungunya et le virus Zika [1,2,3]. En tant que l'une des espèces de moustiques les plus envahissantes avec une reproduction rapide et un comportement agressif [4, 5], Ae. albopictus a étendu avec succès sa présence dans plus de 70 pays à travers le monde [6]. Actuellement, Ae. albopictus est contrôlé par une combinaison de méthodes biologiques, chimiques et physiques, et les insecticides chimiques sont principalement utilisés pour tuer directement les moustiques [7, 8]. Parmi ces insecticides, les pyréthrinoïdes sont les plus largement utilisés en raison de leur large spectre, de leur grande efficacité et de leur faible toxicité pour les mammifères [9, 10].

Les canaux sodiques voltage-dépendants, codés par le gène VGSC, sont la principale cible des insecticides pyréthrinoïdes. Des mutations du gène VGSC pourraient réduire la susceptibilité d’Ae. albopictus aux pyréthrinoïdes, ce qui entraîne une résistance au knockdown [11]. La première mutation sens (F1534C) a été découverte à Singapour en 2011 [12]. La séquence des loci du gène VGSC chez Ae. albopictus est déterminé sur la base de la numérotation des canaux sodiques chez Musca domestica [13]. Plusieurs sites de mutation ont été trouvés dans le gène VGSC chez Ae. Albopictus [14,15,16,17,18,19,20], et trois d'entre eux (1016, 1532 et 1534) ont été confirmés comme étant associés à une résistance au renversement [11]. La mutation de GTA en GGA au site du codon 1016 entraîne un changement d'acide aminé de la valine (V) à la glycine (G) [21]. Au locus 1532, ATC (isoleucine, I) peut être muté en ATA (isoleucine, I) ou ACC (thréonine, T) [14]. Au locus 1534, le TTC de type sauvage (phénylalanine, F) peut être muté de manière synonyme en TTT (phénylalanine, F) ou muté de manière non synonyme en TCC/TCG (sérine, S), TGC (cystéine, C), TTG/CTG/CTC. /TTA (leucine, L), CGC (arginine, R) ou TGG (tryptophane, W) [12, 16, 18,19,20].

Actuellement, la détection de mutations du gène VGSC chez Ae. albopictus repose sur le séquençage de l'ADN ou la PCR allèle spécifique (AS-PCR). Le séquençage de l’ADN est le plus largement utilisé et considéré comme la référence en matière de détection des mutations du VGSC. Cependant, la technologie de séquençage de l’ADN n’est pas adaptée aux études comportant un nombre important d’échantillons en raison de son coût et de ses délais élevés [19]. L’AS-PCR [19] a également été utilisée pour détecter des mutations du VGSC chez Ae. albopictus mais ne convient qu'à la détection sur un seul site, avec une spécificité relativement faible. Par conséquent, une méthode de détection rapide, précise, économique et multisite pour les mutations VGSC chez Ae. albopictus est un besoin urgent.